安捷倫液相色譜使用問題與解決方案 Agilent LC 問題與答案(下)

發(fā)布日期：2017-05-05 作者：Admin 來源：陜西科儀 點(diǎn)擊：624

13.什么原因?qū)е轮Вɡ碚撍鍞?shù)）下降？

與色譜柱相關(guān)的原因：

(1)色譜柱中間出現(xiàn)間斷;處理方法:使用類似的填料填充空隙或更換色譜柱

(2)保護(hù)柱無法再用;處理方法:更換保護(hù)柱

(3)其他可能的原因：柱外體積大、進(jìn)樣的樣品量大、樣品溶劑強(qiáng)度比流動(dòng)相大、流動(dòng)相的改變。

14.改變填料孔徑大小對(duì)液相色譜分離有什么影響？

填料孔徑越小，允許的流動(dòng)相線速度越高。最佳流動(dòng)相線速度取決于固定相的顆粒大小。在最佳線速度時(shí)，色譜柱生成的理論塔板數(shù)最多。對(duì)于內(nèi)徑為 4.6mm 的色譜柱，10um 的顆粒流動(dòng)相線速度為 0.75ml/min 或 5um 的顆粒流動(dòng)相線速度為 1.5ml/min 時(shí)，塔板數(shù)最多。

15.改變色譜柱直徑對(duì)液相色譜分析有什么影響？

如果色譜柱直徑減半，則靈敏性增加四到五倍（假設(shè)進(jìn)樣量不變）。例如，等量的樣品進(jìn)樣到內(nèi)徑為 2.1mm 的色譜柱比進(jìn)樣到內(nèi)徑為 4.6mm 的色譜柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要線性流動(dòng)保持不變，則柱效率、理論塔板數(shù)、反壓和分析時(shí)間等參數(shù)均與色譜柱內(nèi)徑的減小無關(guān)。

16.改變填料顆粒大小和色譜柱的長(zhǎng)度對(duì)液相色譜分離有什么影響？

如果填料顆粒大小減半，則理論塔板數(shù)加倍（假設(shè)柱長(zhǎng)不變）。如果填料顆粒大小減半，則柱壓增加為原來的四倍。 如果柱長(zhǎng)加倍，則理論塔板數(shù)加倍。如果柱長(zhǎng)加倍，則分析時(shí)間加倍。隨著柱長(zhǎng)增加，柱壓也線性地增加。 以下是一個(gè)根據(jù)上述信息選擇色譜柱的示例： 一個(gè)裝填 10um 填料的長(zhǎng)度為 200mm 的色譜柱可生成 6000 塊理論塔板，這是在很多情況下能提供比較適當(dāng)?shù)姆蛛x的色譜柱效率。將顆粒大小由 10um 減小到 5um，柱長(zhǎng)仍為 200mm，則可生成 12000 塊理論塔板。然而，這個(gè)色譜柱可生成相當(dāng)于原來四倍的柱壓。通常情況下不需要生成 12000 塊塔板，因此柱長(zhǎng)可減半至 100mm，結(jié)果生成 6000 塊塔板，同時(shí)分析時(shí)間也縮短一半；柱壓僅比最初裝填 10um 填料的長(zhǎng)度為 200mm 的色譜柱高兩倍。

17.能否提供一種與我使用的LC色譜柱相同的色譜柱？

即使用同一種固定相，不同廠商的液相色譜柱也可能具有不同的保留時(shí)間。 雖然這里提供了一些不同廠商的色譜柱的參考數(shù)據(jù)，但這些數(shù)據(jù)在不同的色譜條件下會(huì)有所不同。我們通常根據(jù)您的應(yīng)用情況，向您推薦一種其它的色譜柱。在此之前，我們需要您提供以下信息： 樣品的詳細(xì)信息（樣品的成分和要分析的成分）； 是否可以接受液相色譜條件的改變； 能否對(duì)您的方法進(jìn)行一些調(diào)整。 如果您不能接受分析條件和/或保留時(shí)間的改變，則應(yīng)該繼續(xù)使用目前的色譜柱。

18.如何選擇液相色譜保護(hù)柱？

保護(hù)柱的作用是用來防止分析柱被一些微粒物質(zhì)堵塞,及在色譜柱上強(qiáng)吸附組分在色譜柱上吸附。為防止樣品的雜質(zhì)不進(jìn)入色譜分析柱,不出現(xiàn)不必要的峰展寬，保護(hù)柱與分析柱的體積比應(yīng)在 1:15 至 1:25 之間。 在理想的情況下，保護(hù)柱的填料應(yīng)與分析柱相同，以確保得到分析柱較好的色譜圖。盡量使保護(hù)柱與分析柱近似。在我們的目錄里，將分析柱和與其配套的保護(hù)柱列在一起。

19.色譜圖上出現(xiàn)鬼峰。如何消除？

可能的原因有：

(1)上次進(jìn)樣遺留組分產(chǎn)生

(2)有污染

(3)有氣泡

(4)色譜柱問題

(5)保護(hù)柱失效

建議用戶:

(1)做樣品后應(yīng)保證有足夠時(shí)間沖洗色譜柱,。有必要的話在運(yùn)行結(jié)束后使用更強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。

(2)洗脫原色譜柱中的原有污染。

(3)為確保系統(tǒng)中沒有氣泡，只使用徹底脫氣后的溶劑。

(4)更換色譜柱。

(5)更換保護(hù)柱。

(6)檢查流動(dòng)相純度。

(7)檢查樣品中的其他成分。

20.我的色譜圖上的峰有拖尾現(xiàn)象。如何改善峰形？

可能的原因：

(1)系統(tǒng)內(nèi)的死體積大

(2)樣品在色譜柱上有吸附

(3)色譜柱使用時(shí)間很長(zhǎng)

建議用戶：

(1)盡量減少流動(dòng)相管線的死體積，確保管線接頭的連接合適減小死體積，由于不同生產(chǎn)廠家的管線的接頭和密封墊圈有可能不一樣，盡量使用安捷倫公司的管線接頭和密封墊圈。

(2)使用洗脫更強(qiáng)的流動(dòng)相

(3)更換新色譜柱

21.什么原因?qū)е禄€波動(dòng)？

基線波動(dòng)有可能與實(shí)驗(yàn)室的溫度及濕度變化有關(guān)系。需確保室溫及濕度穩(wěn)定，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管進(jìn)行隔熱保溫。

22.什么原因?qū)е禄€毛刺？

這很有可能是流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。請(qǐng)先停泵來進(jìn)行確認(rèn),如果毛剌消失，則很有可能是由于流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。需要沖洗流動(dòng)池。如果毛剌仍然存在，則需檢查檢測(cè)器本身的電噪音有關(guān)。如果需要更多幫助，則請(qǐng)致電安捷倫科技公司。在中國(guó)，請(qǐng)撥打800 820 3278。

23.如何減少基線噪音？

無規(guī)律噪音可能與污染有關(guān)。請(qǐng)沖洗色譜柱，對(duì)樣品做合適的前處理以避免污染，并使用 HPLC 級(jí)別的溶劑。 連續(xù)噪音有可能由檢測(cè)器或泵造成。要確定問題是否發(fā)生在檢測(cè)器還是在泵，請(qǐng)先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測(cè)基線。如果此時(shí)基線平穩(wěn)，則噪音可能與泵有關(guān)系。使用 ChemStation 在線診斷或 LC 手持控制器檢查泵方面的故障。如果停泵后噪音繼續(xù)存在，則說明噪音與檢測(cè)器有關(guān)。首先，請(qǐng)嘗試更換燈。如果問題依然存在，則請(qǐng)與安捷倫科技公司聯(lián)系。

24.如何避免液相基線飄移？

基線向上飄移表明系統(tǒng)中有污染。請(qǐng)沖洗色譜柱，凈化樣品，然后使用新溶劑。 向下飄移通常是由于檢測(cè)室或柱箱中的溫度波動(dòng)的原因。減小室溫變化，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是 HPLC 級(jí)別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收。

25.如何排除流動(dòng)相/流動(dòng)池中的氣泡？

避免流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的最佳方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)行脫氣。也可以在檢測(cè)器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)節(jié)流動(dòng)池中的背壓，但必須注意不要超過流動(dòng)池的最大壓力，否則會(huì)造成流動(dòng)池漏液或流動(dòng)池?fù)p壞。 如果流動(dòng)池中出現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱，用一根管線直接將流動(dòng)相接入檢測(cè)器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動(dòng)池。 直到基線上看不到尖峰為止。氣泡就應(yīng)該清除掉了。